故事发生在抗日战争时期。因军统谍网连遭日特粉碎，戴笠（王岗饰）从集中营选出因故做牢的陈一鸣（庹宗华饰）少校，令他组建“眼镜蛇”特工小组，暗算日特驻华头子中村一郎（于震饰），领命后陈一鸣即刻招募各路高人进行培训。这时，美军上校梅乐斯找到戴笠，要他设法营救被中村逮捕的美特工史姑娘夫妇。中共高级特工黄天明（侯勇饰）得到南京黄云睛（吴晓敏饰）送来的谍报，他奉上级指示，将史姑娘夫妇地址位置故意泄露给军统南京站高站长，陈一鸣带着特工小组出发了。他们扮装混入病院，先救出了史姑娘夫妇，然后执行此次来的首要任务：刺杀中村一郎，他们能顺利完成任务吗…